NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)

細胞名稱：NCI-H446     人小細胞肺癌細胞

組織來源：肺；轉移灶：肋膜滲出癌

培養條件：RPMI-1640 +10% FBS

形　　態：貼壁；上皮細胞樣

背　　景：該細胞是1982年由Carney D和Gazdar AF等從一位小細胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細胞的原始形態并不具有小細胞肺癌特征。這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態學上的變種，表達神經元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶；**多巴脫羧酶、蠶素、抗****、催產素或胃泌**釋放肽未達到可檢測水平。與正常細胞相比，該細胞c-myc DNA序列擴增約20倍，RNA增加15倍。*初傳代培養基用含有5%FBS的RPMI-1640，另外添加10 nM氫化可的松、0.005 mg/mL胰島素、0.01 mg/mL轉鐵蛋白、10 nM 17-beta-雌二醇、30 nM 亞硒酸鈉。

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)操作說明：

1)對于常溫運輸的細胞，收到細胞后，檢查是否有運輸問題，即細胞培養瓶或管是否破損，細胞培養液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細胞培養箱中靜置。嚴格檢查培養箱的參數：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態穩定后，即可開始后續操作。選用正確的細胞培養體系，NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)嚴格按照說明書的培養條件進行培養。條件允許，培養的前三天內做細胞拍照記錄，通過郵件發送給我們做及時狀態跟蹤。

2)對于干冰運輸的細胞，請取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。然后將其復蘇培養，次日更換培養液。

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)注意事項：

1)細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時（即某一區域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養基進行培養。 

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)下面介紹幾種細胞培養過程中常見的污染：

一)桿菌污染：培養基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。

二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數情況下是培養用血清。

三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。